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金黄色葡萄球菌毒素基因分布及转录水平表达研究

标题: 金黄色葡萄球菌毒素基因分布及转录水平表达研究
作者: 王佳
出版时间: 2016-05-17
所在大学: 河北农业大学
关键词: 金黄色葡萄球菌,培养条件,时序性表达
论文级别: 硕士
学位: 学位论文
导师: 贾英民
专业: 微生物学
摘要: "金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SA)是一种重要的病原菌,由它分泌产生的肠毒素(SEs)更是诱发食物中毒的主要因素,世界各地关于金葡菌引起的食物中毒事件有很多.而且因SA导致的肺炎及伤口感染,占医院感染病例的10%;抗生素的广泛应用,使MRSA大量出现,让它一举成为与艾滋和乙型肝炎并列的三大恶性传染性病菌.本实验从实验室现有菌株出发,分析研究了sec、sed和MRSA中mecA基因在不同来源SA中的分布及其规律性,并结合之前的研究成果,在转录水平上对SA中肠毒素基因在不同培养基和不同培养阶段表达的影响,以及调控因子的调控作用进行研究.在保藏的436株金黄色葡萄球菌(来自理发用具、人体化脓组织、刀具、空气、果蔬、豆制品、肉制品、速冻食品、生牛乳和生鲜肉)中sec、sed和mecA的总检出率分别为24.1%、8.3%和8.7%,sec检出率明显高于其他两种毒素基因.sec在各种来源中均有分布,速冻食品所占比例最大.sed在空气、刀具、理发用具、水产品及果蔬中都未检出,生鲜肉中的检出率最高.mecA除理发工具、刀具和豆制品,在其余来源中都有分布,果蔬和水产品中的检出率较高.本试验选择金黄色葡萄球菌SA30、SA75、SA83这三株菌,分析了它们在不同培养基中各毒素基因的转录情况.结果发现:菌株SA83中hlb进入对数期时表达量最大;SEU的表达量一直不多;hlg没有检测到.菌株SA75中hlb和SEU在进入对数期时表达量最大;hlg随着菌株生长时间的增长,表达的也越来越多.菌株SA30中hlb在进入稳定期后表达量最大;hlg在进入稳定期时表达量最大;SEU在全过程中都有表达,在10h时表达量最多.金黄色葡萄球菌对不同糖的分解利用能力不同,对乳糖及可溶性淀粉的分解利用能力较低,对葡萄糖和蔗糖的分解利用能力较高.蔗糖最有利于SEA的表达;可溶性淀粉对SEI表达的增强作用最明显;葡萄糖的添加对hld在对数末期的表达有减弱作用;hla仅在葡萄糖、蔗糖中有表达,而且都是在6h,进入对数期时表达;hlb只在含有乳糖的TSB培养基中有极微量的转录,8h时表达量最多,即进入对数期时;蔗糖对hlg的表达可能有抑制作用.RNAⅢ作为调控因子,虽然在每个时段都有检测到,但是它对毒素产生的调控作用并未有明显的体现.许多研究表明金黄色葡萄球菌所生长的环境状况对于不同类型肠毒素的形成有重要影响.鉴于目前的状况,进一步研究金黄色葡萄球菌毒素产生的具体培养条件就显得极为重要.这些科研成果将为环境及食品受金葡菌的污染情形和该菌的流行状态作出快速判断,并为监控由金黄色葡萄球菌所引起的疾病的爆发提供判断的科学根据."