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大丽花组织培养与脱毒技术研究

标题: 大丽花组织培养与脱毒技术研究
作者: 杨婷
出版时间: 2016-05-17
所在大学: 河北农业大学
关键词: 大丽花,组织培养,脱毒体系,茎尖
论文级别: 硕士
学位: 学位论文
导师: 陈段芬
专业: 花卉与景观园艺学
摘要: "大丽花(Dahlia pinnata. Cav)是菊科大丽花属多年生草本球根花卉,在园林绿化、食品工业、生物能源和医药研究等方面应用广泛,具有很高的综合利用价值.近年来,病毒病的发生,导致大丽花品质的严重下降,制约了大丽花产业的发展.本研究以感染大丽花叶病毒(DMV)、黄瓜花叶病毒(CMV-D2)和烟草花叶病毒(TMV)的大丽花为试材,采用茎尖处理、茎尖结合物理、化学的脱毒方法,对大丽花开展脱毒试验,通过酶联免疫吸附反映(ELISA)对脱毒效果进行测定,并对脱毒苗的组培快繁技术进行优化,旨在建立一套操作简便、快速高效且效果稳定的脱毒快繁体系,以期对大丽花产业的健康发展具有积极的指导意义.主要结果如下:一、组培快繁优化研究1)以大丽花顶芽或带腋芽茎段为外植体材料,先用洗洁精浸泡5min,用自来水冲洗2h,之后用75%酒精浸泡30s,再用0.1%升汞处理4~7min,并用无菌水冲洗干净,可以得到无菌苗,外植体平均成活率可达到80%.适宜大丽花的初代培养基为MS+6-BA4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6000mg/L,在培养基中加入2000mg/L的活性炭,可以有效降低褐化率.2)适宜的壮苗继代培养基为:MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6000mg/L,30d后试管苗可长到5~8cm.3)适宜的生根培养基为:1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6000mg/L,生根率达到78.79%,平均生根条数达到6.1条.二、脱毒技术研究1)大丽花茎尖处理:因操作困难,三种病毒的茎尖培养脱毒率仅为10%左右.2)大丽花茎尖结合热处理:为减轻高温对大丽花试管苗的伤害,采用变温处理方法.逐步升高温度至光照下温度升至36℃;黑暗下温度升至33℃,开始进行热处理.热处理时间25d为极限时间,试管苗成活率为40%,对DMV、CMV-D2的脱除率分别为74.7%和66.9%,但不能有效脱除TMV,对3种病毒均脱除的比率为10.6%.3)大丽花茎尖结合化学处理:25mg/L病毒唑处理试管苗,三种病毒的脱除率最高,分别为83.1%、80.5%和77.1%,且DMV较其它两种病毒更容易脱除,三种病毒均脱除的比率为24.3%.但25mg/L病毒唑处理对试管苗生长有轻微抑制作用,继代3~5次后,抑制作用减轻或降为零.4)茎尖结合热处理与茎尖结合化学处理两种脱毒方法对试管苗脱毒效果比较:通过试验发现,热处理与化学药剂处理均能脱除DMV、CMV-D2和TMV.热处理对TMV脱除效果不显著,最高仅为32.4%;相比较而言,茎尖结合化学药剂处理能更有效脱除三种病毒,一方面,当病毒唑浓度为25mg/L时,三种病毒脱除率达到了80%左右,脱毒率高,另一方面,只需在培养基中加入病毒唑,无需昂贵精密的仪器,操作简单.因此,用25mg/L病毒唑处理1cm嫩尖40d后切取1mm茎尖培养,为适宜大丽花的最佳脱毒方法."