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大豆脂肪氧化同工酶(LOX1)单克隆抗体的制备及其检测应用

标题: 大豆脂肪氧化同工酶(LOX1)单克隆抗体的制备及其检测应用
作者: 刘渊
出版时间: 2005-01-01
所在大学: 河北农业大学
关键词: 大豆,脂肪氧化酶,单克隆抗体,ELISA
论文级别: 硕士
学位: 学位论文
导师: 马峙英%张孟臣
专业: 作物遗传育种
提交时间: 2005
摘要: 本实验制备大豆脂肪氧化同工酶(Lox1)的单克隆抗体,并建立了Lox1的检测方法。  本文利用薄板等电聚焦凝胶电泳(IEF-PAGE)鉴定大豆脂肪氧化酶的缺失近等基因系材料,Lox2缺失的情况下,Lox1向pH偏小的方向迁移;Lox1缺失,该酶带消失;Lox3缺失,Lox3a存在,Lox3b蛋白带消失。检测后不同缺失类型的子粒分装保存。并设计通过非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)进行分离,调整分离胶浓度为10﹪,浓缩胶的浓度为5﹪,经过分析不同缺失类型,推断出代表大豆脂肪氧化酶同工酶Lox1、Lox2、Lox3的特异性蛋白条带。本文通过电泳洗脱仪回收三种大豆脂肪氧化同工酶的蛋白条带,考虑到纯化后Lox1的纯度及其酶活均远大于Lox2、Lox3,并且适当减少后期繁重的工作量,仅以Lox1作为免疫抗原。采用紫外分光光度法测定其浓度。