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柿果ACC合成酶反义基因的遗传转化

标题: 柿果ACC合成酶反义基因的遗传转化
作者: 刘聪娟
出版时间: 2006-01-01
所在大学: 河北农业大学
关键词: 上西早生柿,叶片再生,农杆菌介导,遗传转化,ACC合成酶基因
论文级别: 硕士
学位: 学位论文
导师: 马俊莲
专业: 农产品加工及贮藏工程
提交时间: 2006
摘要: 本研究以上西早生柿组培苗叶片为外植体,通过对离体叶片再生条件、抗生素筛选条件和根癌农杆菌介导上西早生柿遗传转化条件的优化,建立了高频再生体系和遗传转化体系,并将ACC合成酶基因导入上西早生柿组培苗中。以期通过转基因的方法抑制ACC合成酶的表达,提高跃变型果实的耐贮性能。主要取得以下研究结果: 1.建立了高效稳定的上西早生柿组培苗叶片再生体系通过对影响上西早生柿叶片再生的基础培养基、激素浓度配比、暗培养时间和叶片部位的研究,得出含氮量低的MS(1/2N)培养基适合上西早生柿的叶片再生,暗培养10天能提高上西早生柿叶片的再生频率,叶片基部的再生能力比叶尖和叶中间部位强,4.0mg/L的ZT能诱导上西早生叶片高效再生。在此条件下,上西早生柿的叶片分化频率达97.8﹪,平均每叶片产生5.6个不定芽。 2.研究了抗生素对不定芽再生和生长的影响,确定了适宜选择压。通过上西早生柿组培苗对抗生素的敏感性试验,确定的选择压为:叶片分化培养过程中,用200mg/L头孢霉素作为脱菌培养的抑菌浓度,20mg/L壮观霉素作为对抗性不定芽的筛选浓度;在抗性苗生长过程中,用100me/L头孢霉素和10mg/L壮观霉素进一步筛选转化抗性苗。 3.建立了高效遗传转化体系,并将ACC合成酶基因导入上西早生柿中。通过对叶片预培养时间、浸染时间、浸染时菌液浓度、AS浓度,共培养时间等遗传转化影响因素的研究,建立的上西早生柿遗传转化体系为:叶片预培养3天,用OD600为0.3的菌液浸染10分钟,共培养4天。获得的上西早生柿抗性苗经PCR扩增检测,证实ACC合成酶基因已经转入上西早生柿基因组中。 4.上西早生柿组培苗生根条件的研究研究了基本培养基、激素种类浓度和暗培养时间对上西早生柿组培苗生根的作用效果。结果表明,1/2MS为最适基本培养基,最佳的激素浓度与配比为IBA1.0mg/L+IAA0mg/L,暗培养5天对上西早生柿组培苗的生根有很大的促进作用。在此条件下,上西早生柿组培苗的生根率达到90﹪以上。