首页>>学术检索

盐酸小檗碱对小鼠金黄色葡萄球菌乳腺炎的疗效及机制研究

标题: 盐酸小檗碱对小鼠金黄色葡萄球菌乳腺炎的疗效及机制研究
作者: 叶宝娜
出版时间: 2007-01-01
所在大学: 河北农业大学
关键词: 盐酸小檗碱,金黄色葡萄球菌,奶牛乳腺炎,中药药理学,TNF-α,IFN-γ
论文级别: 硕士
学位: 学位论文
导师: 郝满良
专业: 临床兽医学
提交时间: 2007
摘要: 本文采用乳腺炎患牛乳样中分离的金黄色葡萄球菌建立小鼠乳腺炎模型;并探索中药单体盐酸小檗碱对小鼠乳腺局部及相关炎症因子的影响,初步探索其作用机制,为研究开发中药防治奶牛乳腺炎提供新的思路和方法。 小鼠金黄色葡萄球菌乳腺炎模型的建立:泌乳8~10d的BALB/c小鼠随机分成健康对照组、生理盐水组和3个不同剂量的接菌组。健康对照组:不做任何处理;50μL灭菌生理盐水、1.0×10<''2>CFU/50μL、5.0x10<''2>CFU/50μL和1.0×10<''3>CFU/50μL细菌悬液分别经乳头管注入生理盐水组和3个不同剂量接菌组小鼠的第四对乳腺内(双侧)。接菌后24h处死小鼠,取部分乳腺进行组织学观察,部分乳腺匀浆测定金黄色葡球菌数及ELISA测定TNF-α、IFN-γ含量。1.0×10<''2>CFU/50μL,接菌组乳腺腺泡结构基本完整,局部视野有上皮细胞脱落,毛细血管轻度充血。5.0x10<''2>CFU/50μL接菌组乳腺腺泡局部崩溃严重,少量腺上皮坏死、脱落,小毛细血管充血.、少量出血,间质轻度水肿,腺泡内、间质中有嗜中性粒细胞浸润。1.0×10<''3>CFU/50μL,接菌组乳腺病变进一步加重。各接菌组母鼠乳腺组织细菌数、TNF-α和INF-γ含量随接菌剂量的增加而上升(P<0.01)。结果表明:各接菌量均可诱发小鼠乳腺炎。但1.0×10<''2> CFU/50μL,接菌组乳腺组织病理变化较轻,.5.0x10<''2>CFU/50μL接菌组乳腺组织病理变化较明显,较1.0×10<''3>CFU/50μL接菌组乳腺组织病理变化轻微,易于进一步监控乳腺的病理变化及药物的治疗作用效果。因此本试验选用5.0x10<''2>CFI/50μL,作为造模剂量。 盐酸小檗碱的体外抑菌试验:按照试管二倍稀释法测得纯度在97%以上的盐酸小檗碱标准品对奶牛乳腺炎临床分离的金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为0.24mg/mL,0.56mg/mL。 盐酸小檗碱对小鼠金黄色葡萄球菌乳腺炎的作用及机制:泌乳8~10d的BALB/c小鼠随机分为4组:(A)生理盐水组,(B)模型组,?低剂量治疗组(0.5mg/mL)和(D)高剂量治疗组(1.0mg/mL)。A组经乳头管注入灭菌生理盐水50μL;B、C、D组分别经乳头管注入5.0x10<''2>CFU/50μL细菌悬液各50gL。A、B组于接菌后0h、12h、24h、36h腹腔注入灭菌生理盐水各0.2mL;C、D组分别于接菌后0h、12h、24h、36h腹腔注入0.5mg/mL、1.0mg/mL的盐酸小檗碱溶液各0.2mL。各组于接菌或注射生理盐水后12h、24h、36h、48h,摘眼球采血后处死小鼠。取部分乳腺进行组织学观察、改良甲苯胺蓝染色观察乳腺肥大细胞的变化,部分乳腺匀浆测定金黄色葡球菌数,ELISA测定乳腺匀浆及血清TNF-α、IFN-γ含量。结果表明:接菌24h后,与模型组相比,低剂量治疗组和高剂量治疗组均能减少乳腺内嗜中性粒细胞的浸润。接菌48h后,模型组乳腺腺泡大部分崩溃,嗜中性粒细胞逐渐减少;治疗组乳腺腺泡病变减轻,PMN浸润少于模型组。与模型组相比,低剂量治疗组、高剂量治疗组在接菌后细菌数均极显著低于模型组(P<0.01),低剂量治疗组细菌数显著高于高剂量治疗组(P<0.05)。模型组和治疗组小鼠乳腺内的肥大细胞数、脱颗粒肥大细胞数随接菌时间延长呈增加趋势,各组间差异不显著,均极显著高于生理盐水组(P<0.01)。在接菌后12~48h问,低、高剂量治疗组小鼠乳腺内肥大细胞数、脱颗粒肥大细胞数总体上低于模型组,但差异不显著。模型组乳腺组织TNF-α、IFN-γ接菌后极显著升高(P<0.01),0.5mg/mL和1.0mg/mL盐酸小檗碱均能显著降低乳腺内TNF-α和IFN-γ的含量,且呈剂量依赖性。接菌后24h治疗组血清IFN-γ水平明显降低:接菌后48h,高剂量治疗组显著低于模型组(P<0.05),低、高剂量组与生理盐水组相比差异不显著。上述结果表明,盐酸小檗碱可抑制乳腺内金黄色葡萄球菌的增殖,减少PMN浸润,降低乳腺组织TNF-α、INF-γ水平,降低血清INF-γ水平并维持在一定范围之内,即参与机体免疫反应又抑制过度的炎症反应,减轻炎症介质对乳腺的损伤,证实盐酸小檗碱对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎有保护作用。 结论:通过乳头管将金黄色葡萄球菌注入小鼠乳腺建立实验性乳腺炎病理模型,接菌量以5.0x10<''2> CFU/50μL为宜;盐酸小檗碱不仅在体外对乳腺炎患牛乳样中分离的金黄色葡萄球菌具有明显的抑菌和杀菌作用,而且能明显抑制金黄色葡萄球菌在小鼠乳腺内的增殖;盐酸小檗碱可明显减轻小鼠金黄色葡萄球菌乳腺炎的病理反应,减轻乳腺局部的炎症表现;盐酸小檗碱对小鼠实验性乳腺炎具有一定的保护作用,为临床防治奶牛乳腺炎新药的筛选提供了一条新的思路和途径。