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农杆菌介导的层出镰刀菌的遗传转化及致病性缺陷突变体的筛选

标题: 农杆菌介导的层出镰刀菌的遗传转化及致病性缺陷突变体的筛选
作者: 刘丽媛,刘力伟,任洁,王树桐,曹克强
召开时间: 2016-08-05
机构: 河北农业大学植物保护学院
关键词: 层出镰刀菌,农杆菌介导遗传转化,TAIL-PCR,苹果再植病害
页码: The Annual Meeting of Chinese Society for Plant Pathology(2016)
会议名称: 中国植物病理学会2016年学术年会
英文会议名称: The Annual Meeting of Chinese Society for Plant Pathology(2016)
会议地点: 中国江苏南京
会议级别: 全国
主办单位: 中国农业科学技术出版社
学会名称: 中国植物病理学会
基金: 国家苹果产业技术体系(CARS-28); 河北省自然科学基金(C2016204140)
主题: 农杆菌介导的层出镰刀菌的遗传转化及致病性缺陷突变体的筛选
分类号: S436.611
摘要: 苹果再植病害(Replant disease of apple,ARD)已经广泛发生在世界苹果的主产区。层出镰刀菌是苹果再植病害的重要致病菌之一,但该病菌的致病机制尚缺乏研究。本研究对农杆菌介导的层出镰刀菌的遗传转化的体系进行优化并构建其突变体库,获得了致病力缺陷的单拷贝插入突变菌株,拟为从分子层面解释层出镰刀菌致病机理的研究奠定基础。对影响H10农杆菌介导转化效率的主要因子进行单因子条件测验,得到其遗传转化体系为:抑制H10菌丝和孢子生长的潮霉素的浓度为100μg/mL,农杆菌OD_(600)的值为0.3,AS浓度为600μg/mL,共培养时间48h。利用这一体系进行H10菌株突变体库的构建,以对潮霉素抗性基因的PCR检测呈阳性的转化子作为插入突变体。经过在不含潮霉素的PDA培养基上5代培养,验证T-DNA插入突变体的遗传稳定性。对稳定遗传的转化子进行产孢和致病力试验分析得到产孢能力显著下降的突变体3株,致病力显著下降的突变体8株。用Southern blot技术验证致病力变弱的突变菌株TDNA插入拷贝的拷贝数,证明有7个突变体为单拷贝插入并能够稳定遗传。用TAIL-PCR技术对产孢量下降且致病力变弱的单拷贝插入的突变体H10-989进行了侧翼序列扩增,对扩增到的片段进行回收测序,经过NCBI-BLAST分析比,获得的序列与水稻恶苗病菌58289基因草图1号染色体序列为同源序列。经tblastx注释与小麦冠腐病菌FPCS3096菌株和禾谷镰刀菌PH-1菌株的假定蛋白mRNA同源。